首创！磁性固相萃取联用岛津LCMS 8050质谱仪检测血清中5种脂溶性维生素

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艾迪迈自研ASP单分散磁性固相萃取微球

国内外近百家色谱质谱应用厂商的选择



01｜背景信息

脂溶性维生素是指不溶于水而溶于脂肪及有机溶剂的维生素,包括维生素A(VA)、维生素D(VD)、维生素E(VE)和维生素K(VK)。

  • VA的主要生理功能有维持上皮细胞完整、维持视觉、促进生长发育等。

  • VD的主要生理功能有调节钙磷代谢、保持骨骼健康、调节免疫功能、促进生长发育等。VD在血清中两种主要形式是25-羟基维生素D2 (25-OHVD2)和25-羟基维生素D3(25-OHVD3)。

  • VE的生理功能有抗氧化作用、促进生殖健康、保护神经系统、支持免疫系统等。

  • 脂溶性VK包括维生素K1(VK1)和K2(VK2)，人体直接摄入的活性形式为VK1具有促进血凝、促进肝脏中凝血酶原合成、参与氧化等功能。


监测脂溶性维生素的含量，为医生和营养专家提供依据，便于评估体内维生素营养状态、吸收障碍或毒性水平，对指导维生素类药物的安全补充，做好疾病预防具有重要意义。

       临床上常规检测血清中脂溶性维生素的前处理方法为液液萃取法、固相萃取法等。

  • 液液萃取法需要用到多种有机溶剂进行萃取，需要较多的人工操作步骤较为耗时，氮吹富集步骤容易造成回收损失。

  • 固相萃取法前序步骤也使用有机溶剂对血清蛋白进行沉淀，离心后样品才可以经过SPE柱提取和净化，较为耗时。

  • 磁性固相萃取(MSPE)在生物样品前处理中应用广泛，它利用磁性修饰的吸附剂(磁珠)吸附分析物，具有操作简单、无需加压过柱、易于自动化的优势，可省去离心、氮吹等步骤，并能兼容高粘度或者浑浊样本。


本文采用了南京艾迪迈科技有限公司旗下公司提供的磁性固相萃取微球及自动化前处理设备对血清前处理，并在LCMS-8050上建立了血清中5种脂溶性维生素的分析方法，该方法灵敏度高、特异性好、前处理过程简单，可为相关从业者参考。


02｜实验部分

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液相条件

  • 色谱柱:Shim-pack GISS C18(50 mm x2.1 mm 1.D.，1.9 μm);

  • 岛津(上海)实验器材有限公司，P/N:227-30048-04

  • 流动相:A相-0.2%甲酸水溶液，B相-0.2%甲酸甲醇溶液

  • 柱温:50℃    

  • 流速:0.25 mL/min

  • 洗 脱方式:梯度洗脱,初始浓度为B相70%，进样体积:20μL

洗脱程序见表 1


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质谱条件


离子源:ESI，正离子模式    

  • DL管温度:200℃

  • 接口电压:4.0kV    

  • 加热模块温度:400℃

  • 雾化气:氮气 3.0L/min    

  • 接口温度:350℃

  • 干燥气:氮气 6.0L/min    

  • 扫描模式:多反应监测(MRM)

  • 加热气:空气 10.0 L/min    

  • 碰撞气:氩气(230kPa)

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03｜样本前处理

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前处理设备

样品前处理使用南京艾迪迈科技有限公司旗下公司提供的样本前处理系统MIP32和疏水键合磁性固相萃取微球处理，见图1。

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前处理过程

   前处理过程如图2所示，样品经过磁珠吸附、萃取、淋洗和洗脱后得到样品溶液，取100 μL 样品溶液加入20μL水涡旋混匀后上机测试。

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04｜结果与讨论


标准曲线最低浓度点MRM谱图如下，色谱峰形良好，通道无干扰。













       本方法使用南京艾迪迈科技有限公司旗下公司全自动磁性固相萃取仪与岛津LCMS-8050测定了血清基质中脂溶性维生素VA、25-OHVD2、25-OHVD3、VE、VK1物质。

       脂溶性维生素在线性范围内线性良好。对低中高三个浓度质控进行分析，平行测试三次，方法精密度良好。质控品测定准确度结果与理论值接近。

       全自动磁性固相萃取仪前处理方法可以在12分钟内结束，并可同时检测32个样本（最大可实现96个样本），该方法相较液液萃取法和固相萃取法，前处理步骤更简单，自动化程度高，结果准确。

       Peakintelligence™色谱峰智能算法进一步提高了积分的准确度，避免积分到临近干扰峰。该方法可用于血清中脂溶性维生素的准确定量检测，供相关从业人员参考。


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